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酶联免疫分析技术（ELISA）广泛用于抗原、半抗原或抗体的定量或定性分析，辣根过氧化物酶（HRP）及其偶联物是ELISA技术常用的一种酶，能催化底物如3,3'5,5'-四甲基联苯胺（TMB）发生显色反应，从而进行定量或定性分析。由于TMB比其他显色底物具更高的灵敏度且无致癌性被广泛使用，TMB主要用于ELISA，免疫斑点杂交或免疫组化等实验，也有报道将其用于氯的检测分析。

通常TMB显色试剂由多个组分构成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不便且容易导致检测结果不稳定。我司采用全新的TMB显色技术，将所有相关试剂全部配在一个溶液，即仅由单一溶液组成，不仅简化了操作步骤，而且使检测结果更加稳定可靠。另外，为了满足用户的其它需求，我司在单组分配方的基础上，还提供双组分配方（A液和B液），用户只需在使用前按照1：1的比例混合使用即可。

本品专门为ELISA实验而设计。检测原理在于HRP或其他适当过氧化物酶能催化生成可溶的蓝色产物，此时通常可在370nm测定吸光度。当显色反应被酸性溶液（如0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）终止后，产物由蓝色转为黄色，此时可在450nm测定吸光度。

• 使用之前，取出适量A液和B液，使其回到室温；于加样前，将A液和B液按照等体积混合后室温避光保存待用。
  
• 参考ELISA检测试剂盒的实验步骤，当与HRP标记抗体孵育一段时间后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
  
• 洗涤完毕后，去除洗涤液，每孔加入100μL新鲜配制的TMB显色液，轻轻混匀。
  
• 室温避光孵育10～30min或更长时间（可长达24h），直至显色到预期深浅。
  
  • 建议根据实验需求选择最佳试剂用量、显色时间和反应温度。
• 每孔加入100μL 1M H2SO4或1M HCl终止反应，孔中反应液由蓝色变为黄色。
  
• 终止反应后15min内在450nm处测定吸光度。